一、试验简介

本标试验定了青鳉鱼(d-rR品系青鳉,以下简称“鱼”)早期生命阶段化学品毒性试验的方法概述、仪器设备、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。适用于测试化学品对鱼类早期生命阶段(胚胎发育和幼鱼生长阶段)的毒性。

二、检测标准

GB/T29764—2013化学品青鳉鱼早期生命阶段毒性试验

三、试验概述

鱼类早期生命阶段毒性试验优先采用流水式试验系统,可选择半静态(静水更新)试验系统,将胚胎-幼鱼阶段的受试鱼(d-rR品系青鳉)暴露于一定浓度范围的受试物水溶液中。试验自受精卵放入试验容器时开始,至幼鱼达到21日龄时结束。通过测定受试鱼的致死和亚致死效应,并与对照组值相比较来测定受试物的LOEC和NOEC。

四、操作概述

试验期间,应定期测定受试物浓度。半静态试验条件下,如受试物浓度保持在设定值±20%内,在整个试验期间应对最高试验浓度和最低试验浓度组至少取样测定3次,样品为新配制的试液和即将更换前的试液。如果试验中受试物浓度不能保持在设定值的±20%内(根据受试物的稳定性数据),就应在新配制试验溶液和更新试验溶液时,对所有试验浓度取样分析,取样的次数、间隔及方式相同,除非之后状况相同(即试验期间至少平均间隔取样3次)。更换试验溶液前对每个试验浓度中的一个平行容器取样测定受试物浓度,且测定间隔不应超过7d。试验结果应以测定浓度为准。但如果整个试验期间受试物浓度保持在设定值或初始浓度值的±20%内,则结果可以设定值或起始测定值为准。流水式试验,取样方式与半静态试验中相同。若试验持续时间超过7d,第1周内应采样测定3次。对样品进行离心或过滤(例如使用0.45μm孔径滤膜)。当两者均无法分离受试物的非生物利用部分和生物利用部分,无需进行样品处理。

试验期间,应测定所有试验容器中的溶解氧、pH值和水温,也应测定对照组和最高浓度组中一个试验容器的总硬度和盐度。溶解氧、盐度应至少每周测量1次;半静态试验应增加溶解氧的测试频率,尤其是每次试验溶液更新前和更新后,或至少一周一次。在半静态试验中,应在每次试验溶液更新的开始和结束时测定pH值,流水式试验中则至少每周测定一次pH值。硬度每次试验测定一次,温度应每天进行测量,且至少在1个试验容器中连续检测。

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一、试验简介

本试验规定了CO2吸收法和氮转化法测定化学农药对土壤微生物毒性的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求。适用于为化学农药登记而进行的土壤微生物毒性试验,其他类型的农药可参照使用。不适用于易挥发和难溶解的化学农药。

二、检测标准

GB/T31270.16—2014化学农药环境安全评价试验准则第16部分:土壤微生物毒性试验

三、试验概述

土壤微生物毒性试验包括CO2吸收法和氮转化法,根据农药登记管理法规及其他规定选择相关方法进行试验。

1、CO₂吸收法在标本瓶内放置两只小烧杯,其中一只盛放土壤,另一只盛放碱液(如NaOH溶液),用于吸收土壤微生物呼吸所释放的CO₂。以模拟农药常用量、10倍常用量、100倍常用量时土壤表层10cm土壤中的农药含量设3种不同处理浓度,将标本瓶密闭并置于25°C±1°C、黑暗条件下培养,并保持土壤含水量为最大田间持水量的40%~60%,于试验开始后的第1天、第2天、第4天、第7天、第11天、第15天更换出密闭瓶中的碱液,测定吸收的CO₂量。评价供试物对土壤微生物活性的影响。

2、氮转化法过筛的土壤与适量有机底物混合后用供试物处理,同时设置一组不加供试物的对照。试验至少需设置2个测试浓度,可参考供试物田间最大施用量设置。将土壤置于黑暗、20°C±2°C的条件下培养,并保持土壤含水量为最大田间持水量的40%~60%,在培养0d、7d、14d和28d后,从处理组和对照组中取出一定量的土壤样品,用合适的溶剂浸提并测定提取液中硝酸盐的含量。比较处理组与对照组的硝酸盐形成率,计算处理组相对于对照组的百分比差异。试验至少持续28d,如果第28天处理组与对照组的差异不小于25%,则试验需延长,最长至100d。

四、试验结果评定

农药对土壤微生物毒性的毒性等级划分：

（1）CO₂吸收法 

CO₂吸收法中,农药对土壤微生物的毒性分成三个等级:土壤中农药加量为常量,在15d内对土壤微生物呼吸强度抑制达50%则划分为高毒;土壤中农药加量为常量10倍,能达到上述抑制水平的,划分为中毒;土壤中农药加量为常量100倍,能达到上述抑制水平的,划分为低毒;若三种处理均达不到上述抑制水平,则同样划分为低毒。

（2）氮转化法

在试验28d后的任何时间所取样品,若测定其低浓度处理组和对照组的硝酸盐形成速率的差异不大于25%,则可认为该农药对土壤中的氮转化没有长期影响。

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一、试验简介

本试验规定了稀有鮈鲫化学品急性毒性试验的方法,包括静态试验、半静态试验和流水式试验三种方式,受试物所需信息、原理、设备与材料、试验系统、试验程序、质量控制和结果报告。适用于测试稀有鮈鲫的化学品急性毒性。

二、检测标准

GB/T29763—2013化学品稀有鮈鲫急性毒性试验

三、试验原理概述

用于测定受试物短期暴露对稀有鮈鲫可能产生的影响,以评价受试物的短期毒性。

将稀有鮈鲫暴露于含不同浓度受试物的水溶液,以96h为试验周期,在24h、48h、72h和96h时记录受试鱼的死亡率,确定50%稀有鮈鲫死亡时的受试物浓度,用LC₅₀表示。

四、试验概述

在试验之前,应根据受试物在水中的化学稳定性确定合适的试验方式,从而选定需用的容器和装置，试验期间,受试物在水溶液中的浓度维持在初始实测浓度的±20%内,可采用静态试验方式。当水溶液中受试物不稳定时,即浓度变化超过±20%时,应采用半静态试验方式或流水式试验系统以维持受试物的浓度。

根据预试验,在包括使稀有鮈鲫全部死亡的最低浓度和96h稀有鮈鲫全部存活的最高浓度之间至少应设置5个浓度组,并以几何级数排布。浓度间隔系数应小于或等于2.2。同时设一个空白对照组。如使用了溶剂,应增设溶剂对照组,且所有试验容器中的溶剂浓度应相同。每一浓度组和对照组应至少使用7尾稀有鮈鲫。

试验溶液调节至试验温度后,从驯养鱼群中随机取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一试验,所有试验用鱼应在30min内分组完毕。8.3.3试验期间,不应对试验液强烈曝气,溶解氧含量应高于空气饱和值的60%。试验期间禁止喂食。

至少在24h、48h、72h和96h后检查受试鱼的状况。如果某尾鱼没有任何肉眼可见的运动(如,鳃的扇动),且碰触尾柄后无反应,即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后,将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h或6h观察各试验组鱼的状况,并记录试验鱼的异常现象(如,鱼体侧翻、失去平衡,游泳能力和呼吸功能减弱,色素沉积等)。

每天至少测定一次所有试验容器中的pH、溶解氧浓度和温度。试验开始和结束时也要测定。8.3.6在试验开始前,应建立有效的受试物在水中的化学分析方法。试验期间,应按要求测定受试物在水中的浓度。

五、试验结果评定

采用合适的统计方法,计算出一定暴露时间的LC₅₀值及95%的置信限。同时绘制试验浓度对死亡率的曲线。

如果试验数据不适于用标准方法计算LC₅₀,可用不引起死亡的最高浓度和引起100%死亡的最低浓度估算LC₅₀,即这两个浓度的几何平均值。

当进行限度试验时,应报告限度试验使用的浓度,并说明LC₅₀大于限度试验所采取的浓度。

试验期间,如受试物实测浓度维持在配制浓度的±20%,可用配制浓度表示结果。如受试物实测浓度无法维持在配制浓度的±20%或受试物LC₅₀值在危害评估分级边界值附近(如,1mg/L、10mg/L、100mg/L),应用实测浓度表示结果。

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